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抗V5标签亲和凝胶图片
产品货号:
YTB4331
中文名称:
抗V5标签亲和凝胶
英文名称:
Anti-V5 Affinity Gel
产品规格:
0.5ml|2ml|10ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本产品由高质量的单克隆鼠源V5抗体与琼脂糖共价偶联而成,可特异性地与常规蛋白表达系统(如哺乳动物细胞、细菌或酵母)中含有V5标签的蛋白结合,从而用于带有V5标签的融合蛋白或蛋白复合物的免疫沉淀(IP)或纯化。

本产品为50%凝胶悬液,包装体积为总体积,每mL本产品中共含有0.5mL纯凝胶(沉淀物)。


V5-tag是从猴副流感病毒V5中分离得到的由14个氨基酸(GKPIPNPLLGLDST)组成的多肽,通过基因重组技术把V5-tag的核酸序列与目的基因的5'端或3'端连接,就可以最终表达形成V5-tag的目的蛋白。V5-tag具有以下优点:V5-tag通常不会与目的蛋白相互作用,并且大多数情况下不会影响目的蛋白的功能;V5-tag作为蛋白标签,后续通过V5抗体、Anti-V5磁珠(YTB4314)或Anti-V5亲和凝胶(YTB4331)即可对目的基因的表达、定位及功能进行检测或对目的蛋白进行纯化、免疫沉淀或免疫共沉淀等。基于以上优点,V5标签已被广泛应用于蛋白表达、纯化、鉴定、相互作用和功能等多方面的研究。


  • 本产品有较高的融合蛋白结合量、特异性强:
    每ml纯凝胶(settled gel)含有约7.5mg V5抗体,可结合约0.5mg融合蛋白,且特异性强,非特异的杂蛋白结合少。
  • 本产品可结合多种形式的V5标签蛋白:
    本产品可特异性地结合N端V5融合蛋白(V5-Protein)、C端V5融合蛋白(Protein-V5)。
  • 本产品可选择多种洗脱方法:
    本产品根据蛋白结构的完整性、生物功能及后续应用的要求等,可使用多种洗脱方法,包括V5多肽、酸性和SDS-PAGE上样缓冲液等洗脱液进行洗脱。特别是V5多肽洗脱后不包含抗体的轻链和重链,可以有效解决免疫沉淀后Western实验中轻链和重链的干扰问题。
  • 本产品可重复使用多次,性价比高:
    在正常情况下,本产品用于相同蛋白的纯化时可回收使用3~5次。如果用于免疫共沉淀检测蛋白-蛋白的相互作用,不推荐重复使用。



浓度50%
基质4%琼脂糖
平均粒径~90μm
抗体小鼠抗V5-tag单抗
抗体类型IgG1
抗体分子量约150kDa
抗体浓度约7.5mg/mL
结合能力0.5mg V5标签蛋白/mL
应用IP、Co-IP、蛋白纯化



组分0.5mL2mL10mL
Anti-V5 Affinity Gel0.5mL2mL10mL
说明书1份

保存:-20℃,有效期一年。


  • 本产品使用前一定要充分重悬,即充分颠倒若干次使混合均匀。
  • 本产品含有微量的防腐剂,不会影响常规的蛋白或蛋白复合物的纯化和免疫沉淀。但如果后续涉及酶活性测定,使用本产品前宜先用TBS等适当溶液洗涤凝胶3次,以充分消除防腐剂可能产生的干扰。
  • 在免疫沉淀或纯化时,建议设计阳性和阴性对照组。
  • 蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作,并应始终放置在4℃或冰浴,以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解,可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物,例如百奥莱博的通用型蛋白酶抑制剂混合物(货号:YT964)、通用型蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(质谱兼容,货号:YTB4017)、蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品专用,货号:YT966)、蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品专用,货号:YTB4018)等,或细菌蛋白酶抑制剂混合物(货号:YT969)。
  • 高浓度的DTT、巯基乙醇、盐酸胍等对本产品与标签蛋白的结合可能有一定影响,但WB及IP细胞裂解液(货号:YT038)、RIPA裂解液(货号:YT609YT610YT611)或NP-40裂解液(货号:YT613)等都完全适用。
  • 若离心不能完全除去蛋白样品中的不溶物,可以将样品溶液用0.45μm的滤膜过滤。



  • 样品的制备
    • 选择合适的裂解液,用于制备细胞或组织的裂解液。优先推荐选择百奥莱博的WB及IP细胞裂解液(货号:YT038)用于细胞或组织样品的裂解。根据特定的实验目的,如有必要,也可以使用百奥莱博的RIPA裂解液(强,货号YT609)、RIPA裂解液(中,货号YT610)或RIPA裂解液(弱,货号YT611)用于样品的制备。如果使用自行配制的或其它公司生产的裂解液,需要确保裂解液的pH为6~8。
    • 具体的细胞或组织样品裂解的制备步骤请参考裂解液的使用说明。制备好的裂解液上清宜置于冰上或4℃存放,随后即可用于免疫沉淀或免疫共沉淀、标签蛋白的纯化等操作。新鲜制备好的样品,建议尽量当天完成免疫沉淀等后续操作,但如果样品不能当天使用,也可以适当分装后-80℃冻存。
  • Anti-V5 Affinity Gel的准备
    由于Anti-V5 Affinity Gel储存在含50%甘油的保护液中,所以需要在加入样品前适当洗涤。
    • 轻轻重悬Anti-V5 Affinity Gel,尽量形成均匀的凝胶悬液,按照通常每100μL细胞裂解液中加入20μL混合均匀的凝胶悬液(以下免疫沉淀法中都以20μL凝胶悬液为例),取适量Anti-V5 Affinity Gel至一洁净离心管中(货号:YTB8001),加入1×TBS (货号:YTB1280YTB1282)至最终体积为约0.5mL。
      注:使用大孔径吸头(如用剪刀剪去部分吸头)吸取凝胶悬液会比较方便。
    • 轻轻重悬Anti-V5 Affinity Gel,6000×g在4℃离心30秒,小心去除上清,不要吸到凝胶。重复上述步骤两次。
    • 按照初始体积的量,用1×TBS重悬Anti-V5 Affinity Gel。
  • 免疫沉淀(IP)
    a 加入凝胶与孵育:
    按照每100μL蛋白样品加入20μL凝胶悬液的比例加入Anti-V5 Affinity Gel,置于侧摆摇床或旋转混合仪上,4℃孵育1~2小时。如需提高结合效率,可4℃孵育过夜。
    b 离心分离:
    孵育完毕后,6000×g在4℃离心30秒,小心去除上清,不要吸到凝胶。
    注:可保留部分上清液,用于检测免疫沉淀的效果。
    c 洗涤:
    加入500μL的1×TBS,轻轻重悬Anti-V5 Affinity Gel,冰浴并置于摇床上5分钟,然后6000×g在4℃离心30秒,小心去除上清,不要吸到凝胶。重复洗涤三次。样品置于冰上用于洗脱。
  • 洗脱
    根据标签蛋白的特点及后续实验要求,可以选择如下3种方法之一进行洗脱。
    • V5竞争洗脱法:
      本方法为非变性法,洗脱效率高,且洗脱后的蛋白保持原有的生物活性,便于后续分析检测。
      • V5多肽洗脱液的配制:取适量V5多肽(YTB1294)溶解于1×TBS中,使其终浓度为150μg/ml,或稀释5mg/ml的V5多肽溶液至150μg/ml。
      • 每20μL原始凝胶悬液体积,加入100μL V5多肽洗脱液(150μg/ml),混匀后置于侧摆摇床或旋转混合仪上,室温摇晃孵育30~60分钟,或4℃孵育1~2小时。为了提高洗脱效率,可延长孵育时间或重复洗脱。V5多肽洗脱液体积一般为凝胶悬液的5倍。
      • 孵育完毕后,6000×g在4℃离心30秒,将上清转移到新的离心管中。上清即为洗脱的V5标签蛋白。
      • 洗脱的V5标签蛋白置于4℃待用,或者-20℃或-80℃长期保存。
        注:由于V5-tag与V5抗体的结合力非常强,V5多肽竞争洗脱的效果可能会不太理想,此时需要对V5多肽浓度及竞争条件进行一定的优化。
    • 酸性洗脱法:
      本方法为非变性法,比较快速且高效。洗脱后的蛋白保持原有的生物活性,便于后续分析检测。
      • 溶液的配制:酸性洗脱液(0.1M Glycine-HCl,pH3.0),中和液(0.5M Tris-HCl,pH7.4,1.5M NaCl)。
      • 每20μL原始凝胶悬液体积,加入100μL酸性洗脱液,混匀后置于侧摆摇床或旋转混合仪上,室温孵育5分钟。酸性洗脱液体积一般为凝胶悬液的5倍。
        注:孵育时间不宜超过15分钟。
      • 孵育完毕后,6000×g在4℃离心30秒,将上清转移到新的离心管中,并立刻加入10μL中和液,适当混匀。
      • 为了获得最大的洗脱效率,可重复步骤b和c,并将相同样品合并。
      • 洗脱并中和的V5标签蛋白置于4℃待用,或者-20℃或-80℃长期保存。
        注1:酸性洗脱法虽然高效,但仍可能低于竞争洗脱法或SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法。
        注2:由于目的蛋白的差异可能对酸性洗脱法的洗脱效率有一定的影响,如果对洗脱效率的要求比较高,可对酸性洗脱液的pH在2.5~3.1之间进行一定的调整,相应的中和液的pH值或量也要进行一定的调整,例如100μL酸性洗脱液(0.1M Glycine-HCl,pH2.8)和15μL中和液(1M Tris-HCl,pH8.5)。
    • SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法:
      本方法为变性法,得到的蛋白样品适合SDS-PAGE电泳或WB检测。
      • SDS-PAGE上样缓冲液的配制:可以直接使用百奥莱博的YT051 SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(2X),但含有DTT等还原剂,用该上样缓冲液洗脱得到的样品中含有V5抗体的轻链和重链。也可以自行参考《分子克隆》等配制不含DTT的2×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。
      • 每20μL原始凝胶悬液体积,加入20μL 2×SDS-PAGE上样缓冲液,95℃加热5分钟。
      • 6000×g在4℃或室温离心30秒,取上清进行SDS-PAGE电泳或WB检测。
        注:由于上样缓冲液中SDS会破坏V5抗体,所以洗脱后的凝胶不能重复使用。

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